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七夕前夕,ELISA試劑盒實驗為你節約時間和她(他)約會吧!

更新時間:2017-08-22   點擊次數:1154次

                

    ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。

如何縮小ELISA實驗中的誤差呢?

要從自然因素(試劑穩定性、準確率、儀器精密度)和人為因素(操作者)兩個方面入手:

(1)檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結和分析問題的能力,對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。

(2)使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。

(3) 評估試劑的實用性。試劑的穩定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。

(4)操作前仔細閱讀說明書。嚴格按照說明書要求進行規范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方,反復試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數的掌握等。

(5) 加樣要準確、快速。化學理論表明,物的量與反應物的量成正相關。加樣不準確,酶物的量不能確定,直接影響顯色結果。另外,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。

(6)洗滌*。洗板不*,酶結合物本底顯色會呈現假陽性。另外,洗滌液要新鮮,現用現配,陳舊的洗滌液會出現本底增高現象,也可能出現假陽性。

(7)嚴控反應時間。反應時間過長,酶失活;反應時間過短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合,物結構松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。

(8)嚴格掌握顯色時間。顯色時間過短,加入終止液反應終止后,底物結合物的量過少,易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結果。

(9)注意試劑保存期,過保存期的試劑不能使用。

   

    結合以上幾點,使我們在為客戶測定試劑時大大提高了結果的真實度,及其快捷度,為客戶提供了方便,減少了實驗周期,想要實驗真實可靠,務必按照此實驗要素執行,方可解決實驗中務必要的麻煩,為您節約時間。




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