胎牛血清熱滅活

 一、“胎牛血清熱滅活”概述：

   采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料，經無菌采集、分離、微孔過濾后而成。本產品無支原體、無牛病毒、無噬毒體、內毒素含量低于1EU/ml，適用于細胞、組織器官培養、細胞株保藏、單抗研制，是醫院、科研院校、動物疫苗、生物制藥廠家重要培養基之一。


二、“胎牛血清熱滅活”使用前處理及儲存條件：

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補體成分，避免補體對細胞產生毒性作用。血清經過滅活也會損失一些對細胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經滅活直接用于培養，這樣做的前提是確認血清中不含補體成分。對于一些品質高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經滅活直接用于細胞培養。 
儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時應避免反復凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時現置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應盡快使用。

 三、操作問題：
如何避免沉淀物的產生?
1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實驗顯示非常容易產生沉淀物。
2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生
3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。
4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56。C，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理?　欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。
四、“”常見問題處理：
1.血清應保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。  
2.解凍血清先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。        
3.血清中沉淀物的出現有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。 
4.加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。 
5.做熱滅活有必要嗎?實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更確保血清的質量! 
6.細胞培養中出現黑點是污染嗎？如何處理？一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點，首先，要肉眼觀察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現可能與以下幾種情況有關： 
（1）細胞生長過老，破碎的細胞殘骸 
（2）血清質量不好，反復凍融的結果 
（3）配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長 
（4）配制培養基的水質、容器不合格?？蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點 
（5）培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除